Una dilución en serie es una cadena de diluciones, donde cada tubo nuevo se prepara diluyendo el anterior. Es la forma estándar de alcanzar concentraciones muy bajas que nunca podrías pipetear directamente: una sola dilución de 1 entre 100.000 necesitaría un volumen de concentrado imposiblemente pequeño, pero cinco pasos de diez veces alcanzan el mismo factor con volúmenes cómodos en cada paso. Este planificador toma una concentración inicial, un factor de dilución por paso y el número de pasos, y devuelve la concentración en cada paso más el factor total y el volumen a transferir cada vez.
Las cuentas son una división repetida. Con una concentración inicial de 100 unidades y un factor de diez por paso, el paso cero es el propio concentrado en 100, el paso uno es 10, el paso dos es 1, el paso tres es 0,1, el paso cuatro es 0,01 y el paso cinco es 0,001. Cada paso divide por el mismo factor, así que tras cinco pasos el factor total es 10 elevado a 5, o 100.000. La herramienta lista cada paso para que puedas etiquetar los tubos de antemano y ver el paso donde aparece tu concentración objetivo, en vez de calcular bajo presión en la mesa.
Veamos un ejemplo con volúmenes. Cada tubo contiene 10 mL y el factor es 10, así que cada transferencia es 10 dividido entre 10, es decir, 1 mL del tubo anterior en 9 mL de disolvente. Pipeteas 1 mL de concentrado en el tubo uno, mezclas, luego pipeteas 1 mL del tubo uno en el tubo dos, y así sucesivamente. El volumen de transferencia es el mismo en cada paso cuando el factor y el volumen del tubo se mantienen constantes, por eso las diluciones en serie son fáciles de repetir pero también fáciles de hacer en piloto automático, así que mantén la atención en qué tubo sostienes en cada paso.
Elegir el factor es una decisión de diseño, no un hábito. Los pasos de diez veces cubren un rango enorme con rapidez, lo que sirve para hallar una concentración desconocida o probar un rango amplio de dosis, pero saltan de forma gruesa: no existe nada entre 10 y 1. Los pasos de dos veces dan una resolución más fina, duplicando el trabajo para el mismo rango pero mostrando una curva más suave, lo que sirve para trabajo de dosis-respuesta donde el cambio interesante ocurre entre puntos de diez veces. Introduce cualquier factor mayor que uno, y la herramienta lo planificará; el factor correcto depende de si necesitas más rango o más resolución.
La acumulación de errores es la advertencia seria del trabajo en serie. Una sola dilución tiene un error de pipeteo, pero una cadena en serie arrastra cada error anterior hacia adelante, porque cada tubo se prepara desde el anterior. Un error del 5 por ciento en el paso uno pasa a formar parte de cada concentración posterior, y un tubo mal etiquetado arruina todos los tubos que vienen después. Mezcla bien cada tubo antes de transferir, cambia las puntas entre pasos y etiqueta cada tubo antes de empezar a pipetear, no después, cuando varios tubos parecidos están en fila y parecen idénticos.
Las unidades y la notación exigen cuidado en concentraciones bajas. Tras varios pasos de diez veces, las concentraciones se convierten en decimales pequeños o notación científica, como 1,0 por 10 elevado a menos 3, y es fácil leer mal un cero. La herramienta muestra los pasos en notación científica por esa razón, para que el número de ceros sea explícito. Mantén la misma unidad de concentración de principio a fin, ya sea mg/mL, mol/L o células por mL, porque mezclar unidades a mitad de cadena rompe toda la serie en silencio, y el error no se verá hasta que tus resultados no tengan sentido.
Este planificador es solo un estimador educativo, y difiere de una herramienta de dilución de un solo paso de forma importante: planifica una cadena, no una dilución. Una herramienta de un solo paso responde una pregunta C1V1 = C2V2 o una pregunta de proporción, mientras que esta herramienta responde la pregunta de planificación de toda una serie, incluido el factor total y el volumen de transferencia en cada paso. El trabajo real de laboratorio exige procedimientos adecuados, normas de seguridad, equipo de protección y supervisión. Planificada de antemano, etiquetada con claridad y pipeteada con cuidado, una dilución en serie es una de las técnicas más fiables del laboratorio.